流式細胞技術原理 Principle of flow cytometry

流式細胞儀是以顯微鏡技術、血球計數技術、噴墨技術為三大基石發展出的儀器,主要由液流系統 (Fluidics)、光學系統 (Optics)、電子系統 (Electronics) 所組成。原理為利用鞘液 (sheath fluid) 流通過程中加壓,使樣品管中的細胞懸浮液循採樣管路進入液流腔 (flow chamber),再利用管徑縮減形成流體動力聚焦 (hydrodynamic focusing),讓細胞或懸浮粒成為單顆排列,依序通過雷射偵訊點。由於細胞大小及內容物會對雷射光造成散射,且雷射光能夠激發標定於細胞上的螢光物質,因此能藉由收集前向散射光 (FSC)、側向散射光 (SSC)、螢光 (FL) 光學訊號,轉換為電子訊號,加以分析而得知樣品中的細胞類型及特性。流式分析圖表以柱型圖 (Histogram) 及點圖 (Dot Plot) 為主,使用柱型圖時需先指定X軸顯示項目,例如螢光強度(FL intensity),Y 軸則顯示相對應於不同訊號強度的顆粒數 (events);使用點圖則 X、Y 軸均需指定,例如 X 軸顯示前散射光強度 (FS integral)、Y 軸顯示側散射光強度 (SS log)。不論是柱型圖或點圖,均可界定或圈選細胞群,針對特定細胞群做進一步分析。流式細胞分選儀除了分析之外,主要功能即細胞分選 (Sorting)。基本能夠進行細胞分選的液流腔必須結合有壓電或電磁轉換器(Piezoelectric Transducer or Electromagnetic Transducer),並需在分選時加上電極板。分選時由於仍持續以雷射光偵測通過的細胞訊號,便可知道目前通過的細胞是否落於欲分選的目標群。同時,利用壓電轉換器帶動液流腔,藉振波原理使流通的水柱形成水珠,當振動頻率與振幅大小調整至適當時,即可利用水珠攜帶如細胞之類的顆粒物質。若通過的細胞落於欲分選的目標群範圍,壓電轉換器即瞬間通電而使水珠帶電,因此水珠自水柱斷裂時帶有電荷,帶電荷的水珠由下方兩側分別帶正負電的電極板 (deflection plates) 引導,落入兩側的樣品收集管中。利用讓水珠帶正電或負電,可決定其所攜帶的細胞要落入哪一側的樣品收集管,不帶電的水珠 (非目標細胞) 則落入中央的收集管或廢液區,收集的細胞可供後續培養或實驗使用。流式細胞技術在生命科學研究上用途廣泛,可應用於細胞週期分析、倍體數分析、染色體核型分析(Chromosome Karyotyping)、基因組大小評估、染色體分選、胞器分選、微生物分析分選、血液及骨髓細胞和淋巴細胞分析分選、鈣離子及膜電位分析、癌症研究、臨床檢驗等方面。


流式細胞技術應用 Applications of Flow Cytometry


植物流式細胞學 Plant Flow Cytometry

Genome Size Estimation

Flow cytometry can estimate the genome size of unknown sample by comparing the DNA contents values between the unknown sample and suitable internal DNA reference standard.

Endopolyploidy Analysis

Flow cytometry demostrates endopolyploidy by measuring additional peaks of 4C, 8C, 16C, 32C & even higher DNA levels using a logartithmic scale.

Cell Cycle Analysis

Flow cytometry can measure the four distinct phases of the cell cycle using DNA fluorescent dyes.



微生物流式細胞學 Microbial Flow Cytometry

Microbial Community Analysis

Cytometric fingerprinting can analyze microbial intracommunity structure variation and identifying subcommunity function.

Bacteria Antibodies Analysis

Uncultured Microbes Sorting


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